L-精氨酸是一種重要的氨基酸，廣泛應(yīng)用于飼料、醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域。目前，以工程化的谷氨酸棒桿菌和大腸桿菌等微生物為催化劑，通過(guò)微生物發(fā)酵的方法生產(chǎn)L-精氨酸是該產(chǎn)品的主要生產(chǎn)方式。合成生物學(xué)在其高效合成中的研究進(jìn)展主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：

一、改造合成途徑關(guān)鍵酶

在大腸桿菌中，乙酰谷氨酸合成酶ArgA是L-精氨酸合成途徑的關(guān)鍵限速酶，會(huì)受到終產(chǎn)物L-精氨酸的反饋抑制。通過(guò)基因工程技術(shù)對(duì)ArgA進(jìn)行改造，使其不再受L-精氨酸的反饋抑制，可促進(jìn)它的合成。在谷氨酸棒桿菌中，關(guān)鍵限速酶是乙酰谷氨酸激酶ArgB，同樣可采用類似方法解除其反饋抑制，提高其產(chǎn)量。

二、解除轉(zhuǎn)錄抑制

在谷氨酸棒桿菌中，阻遏蛋白ArgR和FarR會(huì)結(jié)合在L-精氨酸合成操縱子的相關(guān)基因上游，抑制轉(zhuǎn)錄。通過(guò)基因編輯技術(shù)敲除或弱化這些阻遏蛋白的編碼基因，可解除對(duì)其合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄抑制，從而增加它的合成。大腸桿菌中L-精氨酸合成途徑也受ArgR的轉(zhuǎn)錄負(fù)調(diào)控，采取類似策略也能提升產(chǎn)量。

三、阻斷降解途徑

通過(guò)分析L-精氨酸在微生物細(xì)胞內(nèi)的代謝途徑，確定參與其降解的酶和相關(guān)基因，然后利用基因敲除技術(shù)將這些基因敲除，阻斷它的降解途徑，使更多的前體物質(zhì)用于L-精氨酸的合成。

四、強(qiáng)化輔因子供應(yīng)

L-精氨酸合成過(guò)程需要輔因子NADPH和ATP等參與。通過(guò)優(yōu)化磷酸戊糖途徑、TCA循環(huán)途徑等，可促進(jìn)輔因子NADPH的再生。如在鈍齒棒桿菌中，向磷酸戊糖途徑的相關(guān)基因添加降解標(biāo)簽、替換RBS結(jié)合位點(diǎn)或插入強(qiáng)啟動(dòng)子等，調(diào)控碳通量，促進(jìn)了NADPH的再生，提高了L-精氨酸產(chǎn)量。另外，通過(guò)增加ATP的供應(yīng)，也能為其合成提供能量支持。

五、構(gòu)建高效篩選體系

基于生物傳感器的高通量篩選技術(shù)可用于篩選L-精氨酸高產(chǎn)菌種。

六、優(yōu)化氨甲酰磷酸合成途徑

氨甲酰磷酸為L-精氨酸的生物合成提供氨基甲酰基團(tuán)。江南大學(xué)饒志明教授團(tuán)隊(duì)以鈍齒棒桿菌為底盤細(xì)胞，敲除氨甲酰磷酸合成酶CPS II的大亞基編碼基因carB，然后串聯(lián)表達(dá)CPS II編碼基因提高酶活，并替換谷氨酰胺合成酶GS編碼基因的啟動(dòng)子，增加底物供給，使其產(chǎn)量顯著提高。該團(tuán)隊(duì)還通過(guò)引入新的氨甲酰磷酸合成途徑，提高了胞內(nèi)氨甲酰磷酸總合成速率，最終使重組菌株在 5L 發(fā)酵罐水平的L-精氨酸產(chǎn)量較原始菌株提高了54.5%。

本文來(lái)源：西安浩天生物工程有限公司官網(wǎng)http://www.zhifantuwen.cn/